緋村劍心 演員：佐藤健
傳說中的劊子手，人稱“人斬”拔刀齋。然而自維新伊始，他便立下了不殺之誓，一個人佩戴者無法殺人的逆刃刀，開始了浪客的旅程。在前作中遇見薰等人并成為伙伴。本作中為了維護和平盛世而前去擊敗志志雄，最后因為薰的落水而跳進大海，由師傅比古清十朗救走。流派是飛天御劍流。
神谷熏 演員：武井咲
繼承教神谷活心流的年輕的代師傅，守護著去世的父親道場。性格倔強，非常討厭歪曲真相，充滿同情心。抱著“誰都有一兩個不想提起過去”的心態(tài)對劍心的過往絕口不問，擔(dān)心劍心再度淪為劊子手，期望劍心能將不殺的誓言貫徹下去。劍心在前往京都以前以“到現(xiàn)在為止，謝謝”向熏道別，熏抱著與劍心一起戰(zhàn)斗的決心，前往京都。
志志雄真實 演員：藤原龍也
幕府末期時來自長州派的一名維新志士?！敖T之變”之后，由劍術(shù)和緋村不相上下的他接替拔刀齋，擔(dān)任“影子殺手”。但是維新派并不信任他，怕志志雄把殺手內(nèi)幕公開，維新政府就可能被顛覆。于是派火槍隊將志志雄擊斃，然后焚尸。沒有想到志志雄居然活了下來，并且開始了對維新政府的報復(fù)行動。
相樂左之助 演員：青木崇高
前赤報隊準(zhǔn)隊士，以做打手為生亦以打架為樂。 從小對維新充滿的希望，但是隊長被維新政府以“假軍官”的名義處死之后，便開始痛恨明治維新政府，更企圖推翻它。在一次比武之中，他敗給了緋村劍心，使他認(rèn)識到明治的日本需要的是和平而不是戰(zhàn)爭，于是他也踏上了維護時代和平之路，被劍心稱為最可靠的同伴。
高荷惠 演員：蒼井優(yōu)
一名來自會津的女醫(yī)生。因在戰(zhàn)亂中與家人失散，而來到東京。不料卻被人禁錮起來開始制做鴉片，因而良心受到譴責(zé)，于是開始設(shè)法逃離這個是非之地。終于，她在劍心和左之助的幫助下脫離了束縛，并成為了一名優(yōu)秀的女醫(yī)生。
明神彌彥 演員：大八木凱斗
彌彥的父親戰(zhàn)死上野戰(zhàn)爭，母親也得了重病。彌彥母子為了治病借錢， 但是彌彥母親的病終究還是沒有治好。債主為了讓他還錢，就逼迫彌彥去偷錢，終于有一天，他碰到了劍心和薰，他們幫助彌彥脫離了困境，而彌彥也成了薰的首席大弟子。
